Untersuchungen über den Wirkungsmechanismus antirheumatisch aktiver Pharmaka auf zellulärer und molekularpharmakologischer Ebene

52 Pages·1976·3.89 MB·German

by  Prof. Dr. Karlfried Karzel (auth.)

FFOORRSSCCHHUUNNGGSSBBEERRIICCHHTT DDEESS LLAANNDDEESS NNOORRDDRRHHEEIINN --WWEESSTTFF AALLEENN
NNrr.. 22559900 //FF aacchhggrruuppppee MMeeddiizziinn//BBiioollooggiiee
HHeerraauussggeeggeebbeenn iimm AAuuffttrraaggee ddeess MMiinniisstteerrpprrăăssiiddeenntteenn HHeeiinnzz KKttiihhnn
vvoomm MMiinniisstteerr ffUUrr WWiisssseennsscchhaafftt uunndd FFoorrsscchhuunngg JJoohhaannnneess RRaauu
PPrrooff.. DDrr.. KKaarrllffrriieedd KKaarrzzeell
PPhhaarrmmaakkoollooggiisscchheess IInnssttiittuutt ddeerr UUnniivveerrssiittăătt BBoonnnn
UUnntteerrssuucchhuunnggeenn
uubbeerr ddeenn WWiirrkkuunnggssmmeecchhaanniissmmuuss aannttiirrhheeuummaattiisscchh
aakkttiivveerr PPhhaarrmmaakkaa aauuff zzeelllluullaarreerr
uunndd mmoolleekkuullaarrpphhaarrmmaakkoollooggiisscchheerr EEbbeennee
SSpprriinnggeerr FFaacchhmmeeddiieenn WWiieessbbaaddeenn GGmmbbHH
MMiittaarrbbeeiitteerr ddiieesseess FFoorrsscchhuunnggssbbeerriicchhttss
TTeeiill11::
KKaarrllffrriieedd KKaarrzzeell
HHaannss--DDiieetteerr PPeetteerrss
HHoollggeerr AAuulleepppp
GGuuiiddoo HHaacckk
EEiinnfflluuJJ33 aannttiirrhheeuummaattiisscchh aakkttiivveerr PPhhaarrmmaakkaa aauuff WWaacchhssttuummss-- uunndd VVeerrmmeehh
rruunnggssvvoorrggaannggee ssoowwiiee ddeenn PPrrootteeiinn-- uunndd NNuukklleeiinnssaauurreessttooffffwweecchhsseell vvoonn ZZeellll
ssuussppeennssiioonnsskkuullttuurreenn iinn vviittrroo
TTeeiill 22::
KKaarrllffrriieedd KKaarrzzeell
PPeetteerr SScchh55nnhh55ffeerr
HHaannss--DDiieetteerr PPeetteerrss
VVoollkkeerr DDiinnnneennddaahhll
DDiieettrriicchh PPaaddbbeerrgg
PPeetteerr WWeesstthhooffeenn
PPhhaarrmmaakkaaeeiinniilluussssee aauuff ddaass WWaacchhssttuumm uunndd ddeenn GGllyykkoossaammiinnooggllyykkaannssttooffffwweecchh
sseell vvoonn FFiibbrroobbllaasstteennmmoonnoollaayyeerrkkuullttuurreenn
©© 11997766 bbyy SSpprriinnggeerr FFaacchhmmeeddiieenn WWiieessbbaaddeenn
UUrrsspprruunngglliicchh eerrsscchhiieenneenn bbeeii WWeessttddeeuuttsscchheerr VVeerrllaagg GGmmbbHH,, OOppllaaddeenn 11997766
IISSBBNN 997788--33--553311--0022559900--22 IISSBBNN 997788--33--666633--0066779922--44 ((eeBBooookk))
DDOOII 1100..11000077//997788--33--666633--0066779922--44
Inhalt
Vorwort 5
Teil 1:
EinfluB antirheumatisch aktiver Pharmaka auf Wachstums-
und sowie den Protein- und Nuklein
Vermehrungsvorgănge
săurestoffwechsel von Zellsuspensionskulturen in vitro •... 7
Einlei tung ••••••.•••..•••..••..••.•..•.••.•...•.••.......• 7
Methoden ..•••.••••.••.•••••...•.•••••••••...••.•..••.•..•• 7
Ergebnisse .•••..••.•.••••....•..••.••.•.•••••.••••••.••... 8
Diskussion ••••••••••.•••••...••••.•..•..•••.•.••..•....... 14
Zusammel)fassung ••••••••.•••.•••...••.••.•.....•......•.... 17
Literatur 18
Anhang
a) Tabellen ••....•..•..•••..•...•••............•.•..••.... 19
b) Abbildungen .••.••••.•...•..••••.•...••....•.•.•..••.... 21
Teil 2:
Pharmakaeinflusse auf das Wachstum und den Glykosamino
glykanstoffwechsel von Fibroblastenmonolayerkulturen •..... 35
Einlei tung •.••.••..•.••.•.••••.....•..•..•.•......••••.... 35
Methoden und Material ...•..••.•.•...•••.•.•..........•.... 36
Ergebnisse •.••••.•.•••••••••••••••••••.••••..••••.•..•.•.. 37
Diskussion ..•.........•...•..•......................•..... 40
Literatur 43
Anhang
a) Tabellen •••••.•.•..••.••••.•••••••••••.•••••.•...••.... 44
b) Abbildungen •.•.•.•.•...•.••••.•.•..•.•.••...•••......•. 46
3
AAbbkkUürrzzuunnggssvveerrzzeeiicchhnniiss
EEAATT--ZZeelllleenn:: EEhhrrlliicchh--AAsscciitteessttuummoorrzzeelllleenn
DDNNSS:: Desoxyribonukleinsäure
Desoxyribonukleinsăure
RRNNSSii:: Ribonukleinsäure
Ribonukleinsăure
IIDD 5500:: IInnhhiibbiittoorriisscchhee DDoossiiss 5500 == 5500~~iiggee HHeemmmmddoossiiss
GGAAGG:: GGllyykkoossaammiinnooggllyykkaannee
ccAAMMPP:: ZZyykklliisscchheess AAddeennoossiinnmmoonnoopphhoosspphhaatt == CCyycclloo--33'',,55''--aaddeennoo
ssiinnmmoonnoopphhoosspphhaatt
DDbb--ccAAMMPP:: DDiibbuuttyyrryyll--ccyycclloo--AAMMPP == NN66,,0022__DDiibbuuttyyrryyll--ccyyccllOO--33'',,55ff
aaddeennoossiinnmmoonnoopphhoosspphhaatt
PPGGEE11:: PPrroossttaaggilaannddiinn EE11
44
Vorwort
Den Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises kommt sowohl
im Hinblick auf den betroffenen Patienten als auch in sozial
okonomischer Hinsicht eine erhebliche Bedeutung zu. Die medi
kamentose Therapie dieser Erkrankungen hat einerseits durch
aus positive Ergebnisse aufzuweisen, ist andrerseits aber mit
einer Reihe von Problemen behaftet. Zu nennen beispiels
wăren
weise die bei der Anwendung antirheumatisch wirksamer Arznei
mittel auftretenden Nebenerscheinungen, die umso mehr ins Ge
wicht fallen, als bei den rheumatischen Erkrankungen hăufig
eine Langzeittherapie erforderlich ist. Genauere Kenntnisse
Uber die Mechanismen der therapeutischen Wirkungen
zellulăren
und der Nebenwirkungen dieser Pharmaka eine wesentliche
wăren
Voraussetzung fUr eine rationellere Anwendung dieser Mittel
wie auch fUr die Entwicklung neuer Antirheumatika mit einem
gUnstigeren therapeutischen Index. Untersuchungen zur Erfor
schung des Wirkungsmechanismus antirheumatisch aktiver Ver
bindungen kommt daher nicht nur theoretischea Interesse, son
dern auch eine erhebliche praktische Bedeutung zu.
Einen Ausgangspunkt fUr die Untersuchungen Uber den Wirkungs
mechanismus der Antirheumatika stellt die von Domenjoz (1969)
und Karzel (1967) entwickelte Arbeitshypothese dar, nach der
therapeutische Wirkungen aber auch unerwUnschte Wirkungskom
ponenten der Antirheumatika u.a. durch zytostatische Effekte
bzw. Eingriffe in den Wachstums- und VermehrungsstoffWechsel
bestimmter korpereigener Zellen bedingt sein konnen. Als ge
eignetes Modell zur Bearbeitung dieser Fragen schienen uns
in vitro-Kulturen tierischer Zellen mit hoher Vermehrungs
rate besonders gUnstige Voraussetzungen zu bieten. Zellkul
turen ermoglichen es, PharmakaeinflUsse auf die
Lebensfăhig­
keit und die Wachstums- und sowie den
Vermehrungsvorgănge
Vermehrungsstoffwechsel eines definierten Zelltyps unter Aus
schaltung regulierender oder modifizierender Faktoren von
Seiten eines Ubergeordneten Organismus zu untersuchen. Als
Versuchsobjekt fUr diesen Zweck diente ein permanent in vi
tro in Suspensionsform zUchtbarer Stamm von Ehrlich-Ascitea
tumorzellen (Karzel, 1965).
Ein weiterer Ansatzpunkt fUr unsere Untersuchungen war der
von verschiedenen Autoren beschriebene und auch in eigenen
5
Arbe1ten erhobene Befund, daB Antirheumatika und Antarthro
tika den Glykosaminoglykanstoffwechsel mesenchymaler Zellen
hemmend oder stimulierend beeinflussen konnen. Da Storungen
des zellularen Glykosaminoglykanstoffwechsels offenbar in en
ger ursachlicher Beziehung zu den Erkrankungen des rheumati
schen Formenkreises stehen, hatten wir uns das ZieI gesetzt,
zur Klarung der diesen Stoffwechselprozessen zugrundeliegen
den zellularen Mechanismen beizutragen sowie potentielle Wir
kungsmechanismen der diese Prozesse beeinflussenden Pharmaka
zu untersuchen. Als Arbeitsmodell schienen uns wiederum Zell
kulturen besonders geeignet, und zwar in diesem FalI primar
angelegte Fibroblastenkulturen, weil Kulturen dieser Art auch
in vitro Glykosaminoglykane synthetisieren und sezernieren.
Literatur
Domenjoz, R.: Arbeitsgemeinschaft fUr Forschung des Landes
Nordrhein-Westfalen, Heft 193, p. 97; Westdeutscher Ver
lag, Koln-Opladen.
Karzel, K.: Med. Pharmacol. exp. ~, 137 (1965).
Karzel, K.: Arah. int. Pharmacodyn. 169, 70 (1967).
6
Teil 1:
EinfluB antirheumatisch aktiver Pharmaka auf Wachstums- und Ver
sowie den Protein- und
mehrungsvorgănge Nukleinsăurestoffwechsel
von Zellsuspensionskulturen in vitro
Einleitung
In frliheren Untersuchungen an Kulturen normaler und neoplasti
scher Zellen in vitro hatte sich ergeben, da6 Antirheumatica
zytozide und zytostatische Wirkungen ausliben (Karzel 1967). Da
derartige Effekte bereits bei Anwendung ăhnlicher Konzentra
tionen auftraten, wie sie unter klinischen Bedingungen im
Blutplasma von Patienten erreicht werden, schien uns die Ar
beitshypothese gerechtfertigt, therapeutische ebenso wie
da~
unerwlinschte Wirkungen dieser Verbindungen ganz oder teilweise
auf einer Hemmung von Wachstums-, Vermehrungs- oder Synthese
teilungsfahiger Zellen beruhen. So konnte der anti
vorgăngen
phlogistische bzw. antirheumatische Effekt dieser Stoffe mit
einer der entztindlich bedingten Proliferation
Einschrănkung
der Fibroblasten im bzw. mit einer Einwirkung auf
Bindeg~
immunkompetente Zellen erklărt werden, wăhrend die unerwtinsch
te ulcerogene Wirkung auf eine Reduktion der normalerweise re
lativ hohen Zellumsatzrate der Magen-Darmschleimhaut zurlick
geflihrt werden konnte.
ZieI der vorliegenden Untersuchungen war es, zur KIărung der
zellulăren Mechanismen der zytostatischen Wirkungen der Anti
rheumatica beizutragen. Als Arbeitsmodell wurden Zellsuspen
sionskulturen gewahlt, weil diese ein relativ homogenes System
darstellen, an dem Pharmakaeinfllisse auf Lebens-,
zellulăre
Vermehrungs- und Stoffwechselprozesse unter weitgehender Aus
schaltung modifizierender oder regulierender Faktoren seitens
eines libergeordneten Organismus untersucht werden konnen.
Methoden
Als Versuchsobjekt diente eine permanent in vitro in Suspen
sionsform wachsende Linie von Ehrlich-Ascitestumorzellen
(Karzel 1965). Die Zellen wurden im Năhrmedium nach Eagle in
stationărer Form bei 370 C gezlichtet (Einze1heiten zur Tech
nik s. Karze1 1965, 1967; Karzel und Schmid 1968).
Die Zel1zahl pro Volumeneinheit Ku1turmedium sowie das Ze11-
7
vvoolluummeenn bbzzww.. ddeerr ZZeelllldduurrcchhmmeesssseerr wwuurrddeenn ssoowwoohhll mmiikkrroosskkooppiisscchh
aallss aauucchh eelleekkttrroonniisscchh mmiitt HHiillffee ddeess Zählgerätes nnaaoohh CCoouulltteerr
Zăhlgerătes
((11995566)) ((CCoouulltteerr CCoouunntteerr,, MMooddeellll AA mmeedd..)) bbeessttiimmmmtt.. ZZeellllvvoolluummeenn
vveerrtteeiilluunnggsskkuurrvveenn wwuurrddeenn eebbeennffaallllss mmiitt HHiillffee ddeess CCoouulltteerrssoohheenn
ZZäahhllggeerräatteess eerrsstteelllltt ((EEiinnzzeellhheeiitteenn zzuurr TTeecchhnniikk ss.. KKaarrzzeell uunndd
HHaacckk 11997711))..
DDeerr PPrrootteeiinnggeehhaalltt ddeerr ZZeelllleenn wwuurrddee nnaacchh ddeerr MMeetthhooddee vvoonn OOyyaammaa
uunndd EEaaggllee ((11995566)),, ddeerr DDeessooxxyyrriibboonnuukkleleiinnssăäuurreeggeehhaalltt ((DDNNSS)) nnaaoohh
ddeenn AAnnggaabbeenn vvoonn CCeerriioottttii ((11995522)) uunndd ddeerr RRiibboonnuukklleeiinnssăäuurreeggeehhaalltt
((RRNNSS)) nnaacchh ddeemm VVeerrffaahhrreenn vvoonn lI--SSaann LLiinn uunndd SScchhjjeeiiddee ((11996699)) eerr
mmiitttteelltt..
DDiiee ggeewwoonnnneenneenn DDaatteenn wwuurrddeenn eeiinneerr RReeggrreessssiioonnssaannaallyyssee ((nniicchhtt
lliinneeaarree RReeggrreessssiioonn)) uunndd eeiinneerr KKoorrrreellaattiioonnssaannaallyyssee uunntteerrzzooggeenn..
DDiiee BBeerreeoohhnnuunnggeenn wwuurrddeenn mmiitt HHiillffee ddeerr DDaatteennvveerraarrbbeeiittuunnggssaannllaaggee
IIBBMM 77009900//11441100 ddeerr GGeesseellllssoohhaafftt ffUürr MMaatthheemmaattiikk uunndd DDaatteennvveerraarr
bbeeiittuunngg mmbbHH..,, BBoonnnn,, dduurrcchhggeeffUühhrrtt.. DDiiee BBeessttiimmmmuunngg ddeerr mmiittttlleerreenn
zzyyttoossttaattiisscchh wwiirrkkssaammeenn KKoonnzzeennttrraattiioonn ((IIDD5500)) ddeerr PPhhaarrmmaakkaa uunndd
ddeerr NNeeiigguunnggssffuunnkkttiioonn ddeerr DDoossiiss--WWiirrkkuunnggssggeerraaddeenn eerrffoollggttee nnaaoohh
ddeemm VVeerrffaahhrreenn vvoonn LLiittcchhffiieelldd uunndd WWiillooooxxoonn ((11994499))..
FFoollggeennddee PPhhaarrmmaakkaa wwuurrddeenn iinn ddiiee UUnntteerrssuucchhuunnggeenn eeiinnbbeezzooggeenn::
NNaattrriiuummssaalliiccyyllaatt;; SSaalliiccyyllaammiinnoopphheennaazzoonn;; PPhheennyyllbbuuttaazzoonn ((BBuuttaa
zzOOlliiddiinn((RR»»;; ooxxyy))hheennbbuuttaazzoonn ((TTaannddeerriill((RR»»;; CChhlloorrooqquuiinnddiipphhooss
pphhaatt ((RReessoocchhiinn((RR ));; MMeeffeennaammssäauurree ((ppoonnssttaann((RR»»;; FFlluuffeennaammssăäuurree
((AArrlleeff((RR»»;; NNiifflluummiinnssăäuurree ((NNiifflluurriill((RR»»;; AAzzaapprrooppaazzoonn ((Pprroollii
xxaann((RR»»;; AAllccllooffeennaacc ((MMeerrvvaann((RR»»;; BBuuffeexxaammaacc ((DDrrooxxaarrYYll((RR»»;;
IIbbuupprrooffeenn ((BBrruuffeenn((RR»»;; BBeennzzyyddaammiinnhhyyddrroocchhlloorriidd ((TTaannttuumm((RR»»;;
CCoollcchhiicciinn;; CCyycclloohheexxiimmiidd;; MMeetthhoottrreexxaatt;; 66--MMeerrccaappttooppuurriinn;; PPrroo
ccaarrbbaazziinn ((NNaattuullaann((RR»»..
EErrggeebbnniissssee
DDeerr EEiinnfflluuEß eeiinniiggeerr PPhhaarrmmaakkaa aauuff ddiiee LLeebbeennss-- uunndd VVeerrmmeehhrruummggss
fähigkeit iinn vviittrroo ggeezzUücchhtteetteerr EEhhrrlliicchh--AAsscciitteessttuummoorrzzeelllleenn
făhigkeit
((EEAATT--ZZeelllleenn)) iisstt bbeeiissppiieellhhaafftt ffUürr 33 AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa uunndd vveerr
gglleeiicchhsswweeiissee ffUürr 33 ZZyyttoossttaattiikkaa iinn AAbbbb.. 11 iinn FFoorrmm vvoonn DDoossiiss
WWiirrkkuunnggsskkuurrvveenn wwiieeddeerrggeeggeebbeenn.. DDiiee DDiicahhttee ddeerr ZZeelllleeiinnssaaaatt llaagg
bbeeii ddiieesseenn VVeerrssuucchheenn bbeeii eettwwaa 5500%% ddeess KKoonnttrroolllleennddwweerrtteess;; ddaa
hheerr eennttsspprriicchhtt ddiiee uunntteerree Hälfte ddearr jjeewweeiilliiggeenn KKuurrvvee eeiinneemm
Hălfte
zzyyttoossttaattiisscchheenn EEffffeekktt,, während iinn ddiiee oobbeerree Hälfte aauucahh zzyyttoo
wăhrend Hălfte
zziiddee WWiirrkkuunnggeenn eeiinnggeehheenn.. NNaattrriiuummssaalliiccyyllaatt zzeeiiggttee iinn vviittrroo
eeiinnee äăhhnnlliicchhee ccyyttoossttaattiisscchhee WWiirrkkuunnggssssttäarrkkee wwiiee ddaass OOnnkkoollyyttiikkuumm
88
PPrrooccaarrbbaazziinn,, während ddiiee AAkkttiivviittäatt ddeerr FFlluuffeennaammssäauurree eettwwaa ddeerr
wăhrend
jjeenniiggeenn ddeess 66--MMeerrccaappttooppuurriinnss eennttsspprraacchh uunndd BBeennzzyyddaammiinn ssooggaarr
eettwwaass ssttäarrkkeerr wwiirrkkssaamm wwaarr.. IImm GGeeggeennssaattzz zzuu ddeenn ZZyyttoossttaattiikkaa,,
ddiiee vvoorrwwiieeggeenndd eeiinnee HHeemmmmuunngg ddeerr ZZeellllvv eerrmmeehhrruunngg vveerruurrssaaoohhtteenn,,
lliieeSßeenn ddiiee AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa ddaaTrUÜbbeerrhhiinnaauuss hhäauuffiigg eeiinnee ddeeuuttlliioohh
aauussggeepprräaggttee zzyyttoozziiddee AAkkttiivviittäatt eerrkkeennnneenn.. DDiieess ddrrUüookktt ssiioohh iimm
AAnnssttiieegg ddeerr DDoossiiss--WWiirrkkuunnggsskkuurrvveenn Uübbeerr ddeenn 5500%%--WWeerrtt aauuss.. DDiiee
WWeerrttee ffUürr ddiiee zzyyttoossttaattiissoohhee IIDD5500 uunndd ffUürr ddiiee NNeeiigguunnggssffuunnkkttiioonn
ddeerr zzuuggeehhöorriiggeenn DDoossiiss--WWiirrkkuunnggssggeerraaddeenn ddeerr ggeepprrUüfftteenn AAnnttiirrhheeuu
mmaattiikkaa ssiinndd iinn TTaabbeellllee 11 zzuussaammmmeennggeeffaaSßtt..
GGeewwiissssee HHiinnwweeiissee aauuff ppootteennttiieellllee MMeeoohhaanniissmmeenn ddeerr zzyyttoossttaattii
ssoohheenn WWiirrkkuunngg ddeerr AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa ((uunndd aannddeerreerr PPhhaarrmmaakkaa)) kköonn
nneenn seiicchh aauuss VVeerräannddeerruunnggeenn ddeess mmiittttlleerreenn ZZeellllvvoolluummeennes bbzzww.. ddeerr
ZZeellllvvoolluummeennvveerrtteeiilluunngg ddeerr bbeehhaannddeelltteenn KKuullttuurreenn eerrggeebbeenn.. UUnntteerr
ddeerr EEiinnwwiirrkkuunngg zzyyttooesttaattiisscchheerr KKoonnzzeennttrraattiioonneenn ddeerr AAnnttiirrhheeuummaattii
kkaa kkaamm eess hhäauuffiigg zzuu eeiinneemm AAnnssttiieegg ddeerr mmiittttlleerreenn ZZeellllvvoolluummeenn
wweerrttee,, ddeemm iinn ddeerr RReeggeell eeiinnee rreellaattiivvee ZZuunnaahhmmee ddeerr ggrrooßavvoolluummiiggeenn
ZZeelllleenn aauuff KKoosstteenn ddeerr mmiitttteellggrrooSßeenn ZZeelllleenn zzuuggrruunnddeellaagg.. DDiieess iisstt
iinn AAbbbb.. 22 aamm BBeeiissppiieell vveerrssoohhiieeddeenneerr PPhheennyyllbbuuttaazzoonnkkoonnzzeennttrraattiioo
nneenn ggeezzeeiiggtt.. VVeerrssuucchhsseerrggeebbnniissssee ffUürr wweeiitteerree AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa ffiinn
ddeenn ssiioohh bbeeii KKaarrzzeell,, AAuulleepppp uunndd HHaaookk ((11997733)) seoowwiiee HHaaookk uunndd
KKaarrzzeell ((11997744)).. EEiinnee gglleeiicchhggeerriicchhtteettee VVeerraännddeerruunngg ddeerr VVoolluummeenn
vveerrtteeiilluunnggsskkuurrvvee wwiiee bbeeii PPhheennyyllbbuuttaazzoonn uunndd aannddeerreenn AAnnttiirrhheeuummaa
ttiikkaa wwiirrdd uunntteerr ddeemm EEiinnfflluuSß ddeerr MMiittoosseehheemmmmssttooffffee CCoolloohhiicciinn uunndd
KKiittoommyycciinn bbeeoobbaacchhtteett;; aalllleerrddiinnggss kkaannnn ddiiee rreellaattiivvee ZZuunnaahhmmee ddeerr
ggrrooGßvvoolluummiiggeenn ZZeelllleenn hhiieerr wweesseennttlliicchh ddeeuuttlliicchheerr aauussggeepprräaggtt
sseeiinn.. IImm FFaallIl ddeerr MMiittoosseehheemmmmssttooffffee eerrkklläarrtt ssiicchh ddeerr AAnnssttiieegg
ddeess mmiittttlleerreenn ZZeellllvvoolluummeennss aauuss ddeerr BBllooookkiieerruunngg ddeerr MMiittooesee iinn
ddeerr MMeettaapphhaassee uunndd ddeerr AAnnrreeiicchheerruunngg ggrrooSßeerr MMeettaapphhaasseezzeelllleenn iinn
ddeerr KKuullttuurr.. EEiinnee äahhnnlliicchhee DDeeuuttuunngg ddUürrffttee ffUürr ddiiee AAnnttiirrhheeuummaattii
kkaa nniioohhtt iinn FFrraaggee kkoommmmeenn.. EEiinnee ZZuunnaahhmmee ddeerr MMeettaapphhaasseezzeelllleenn wwaarr
uunntteerr ddeemm EEiinnfflluußa ddeerr AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa -- seoowweeiitt ddiieess bbiisshheerr uunn
tteerrssuucchhtt wwoorrddeenn iisstt -- nniicchhtt nnaacchhwweeiissbbaarr ((KKaarrzzeell uunndd PPeetteerrss
11997766)).. DDeerr EEffffeekktt ddeerr AAnnttiirrhheeuummaattiikkaa aauuff ddaass ZZeellllvvoolluummeenn lliieeßaee
ssiicchh bbeeiissppiieellsswweeiissee mmiitt eeiinneerr VVeerrlläannggeerruunngg ddeerr ZZeellllggeenneerraa
ttiioonnsszzeeiitt eerrkklläarreenn.. WWiiee AAbbbb.. 33 erkennen. läßt, ffiinnddeett ssiicchh bbeeii
erkennen.lăat,
uunnbbeehhaannddeelltteenn KKoonnttrroollllkkuullttuurreenn eettwwaa iinn ddeerr MMiittttee ddeerr 2244--ssttUünn
ddiiggeenn IInnkkuubbaattiioonnsszzeeiitt iimm VVeerrgglleeiioohh zzuumm IInnkkuubbaattiioonnsseennddee eeiinnee
äahhnnlliioohhee ZZuunnaahhmmee ggrrooSßvvoolluummiiggeerr ZZeelllleenn wwiiee uunntteerr PPhheennyyllbbuuttaazzoonn
((KKaarrzzeell uunndd HHaacckk 11997722)).. DDiieess ddUürrffttee ddaammiitt zzuuseaammmmeennhhăännggeenn,, ddaa6ß
99
unter Kontrollbedingungen bis zu diesem Zeitpunkt Synthesepro
zesse im Vordergrund stehen, die
wăhrend Zellteilungavorgănge
erst nach einer gewissen Latenzphase einsetzen. Die antirheu
matikabedingte Zunahme des mittleren Zellvolumens konnte wei
terhin mit der Hemmung der Synthese einer fUr die Mitose es
aentiellen Zellkomponente, die nicht ins Gewicht
mengenmăEig
werden; ea dann zu einer Anreicherung gro
fălIt, erklărt kăme
aer G2-Phase-Zellen in der Kultur, die aich auf Grund irgend
einea Defektes oder Mangelzustandes nicht teilen konnen.
Vnter der Einwirkung hoherer Konzentrationen einiger Antirheu
matika wurde andreraeits auch eine relative Zunahme kleinvo
lumiger Zellen in der Kultur beobachtet. Dies Iăat Abb. 4 am
Beispiel der erkennen. Ein derartiges Bild konnte
Mefenamaăure
auf eine Hemmung anaboler Prozesse hindeuten. sind
Tatsăchlich
solche der Zellvolumenverteilungskurve nach der
Verănderungen
Einwirkung von Pharmaka, welche die Proteinsynthese
zellulăre
hemmen, wie etwa Cycloheximid, wesentlich deutlicher auage
pragt (vgl, Hack und Karzel 1974).
Weitere Hinweise auf die der zytostatischen Wirkung der Anti
rheumatika zU6rundeliegenden Mechanismen konnen siah aus Ver
der fUr die Zellvermehrung bedeutsamen biochemisohen
ănderungen
Parameter, wie Protein-, DNS- und RNS-Gehalt, ergeben. Ala Ba
ais fUr die in Bezug auf dieae Fragestellung durchgefUhrten Un
tersuchungen zeigt Abb. 5 das Verhalten dieser 3 Parameter so
wie der Zellzahl unter Kontrollbedingungen der Ublichen
wăhrend
Inkubationszeit von 24 Stunden. Die Zellzahl steigt von einer
Einsaatdichte von 2x105 Zellen/ml auf durchschnittlich 5.0-5.5x
105 Zellen/ mI Kulturmedium. Die 24-stUndige Inkubationszeit
bei den vorliegenden Bedingungen vollstandig oder weit
fălIt
gehend in die logarithmische Vermehrungsphase der Kultur (s.
auch Karzel und Schmid 1968). Die auf die Zellzahl bzw. prozen
tual auf die Ausgangsdaten bezogenen Werte fUr den Protein-,
RNS- und DNS-Gehalt steigen an, erreichen nach 12 bis
zunăchst
18 Stunden ein Maximum, um anschlie6end wieder abzufallen. Bei
der PrUfung von Antirheumatika an dieaem Modell wurden in der
Regel 3 Wirkstoffkonzentrationen appliziert, die auf Grund von
Vorversuchen so wurden, da6 eine abgestufte Hemmung
ausgewăhlt
der Zellvermehrung im Bereich zwischen 10 und 90~ erzielt wur
de.
Die Ergebnisse der Versuche mit Phenylbutazon sind unter ver-
10