TESIS DOCTORAL Análisis comparativo de las vías de carcinogénesis colorrectal entre dos ...

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UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE MEDICINA

TESIS DOCTORAL

Análisis comparativo de las vías de carcinogénesis colorrectal
entre dos grupos de edades diferenciados

MEMORIA PARA OPTAR AL GRADO DE DOCTOR

PRESENTADA POR

Fernando Jiménez Escovar

Directores

José Perea García
Antonio José Torres García
Carlos Cerdán Santacruz

Madrid, 2017

© Fernando Jiménez Escovar, 2016
UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE MEDICINA

ANÁLISIS COMPARATIVO DE LAS VÍAS DE CARCINOGÉNESIS
COLORRECTAL ENTRE DOS GRUPOS DE EDADES DIFERENCIADOS

FERNANDO JIMÉNEZ ESCOVAR

MADRID, 2015
UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE MEDICINA

ANÁLISIS COMPARATIVO DE LAS VÍAS DE CARCINOGÉNESIS
COLORRECTAL ENTRE DOS GRUPOS DE EDADES DIFERENCIADOS

DOCTORANDO:

FERNANDO JIMÉNEZ ESCOVAR

Directores:
José Perea García
Antonio José Torres García
Carlos Cerdán Santacruz
MADRID, 2015

INDICE
AGRADECIMIENTOS
  1

ABREVIATURAS
  2

RELACIÓN
 DE
 TABLAS
  3

RELACIÓN
 DE
 FIGURAS
  6

RESUMEN
  8

SUMMARY
  15

I.
 INTRODUCCIÓN.
  21

1.EL
 CÁNCER,
 UNA
 ENFERMEDAD
 GENÉTICA. 21

2.EL
 CÁNCER
 COLORRECTAL.
 GENERALIDADES. 25

2.1.
 EPIDEMIOLOGÍA.
  25

2.2.
 FACTORES
 DE
 RIESGO.
 EDAD
 E
 HISTORIA
 FAMILIAR.
  26

2.3.
 DIAGNÓSTICO
 DEL
 CÁNCER
 COLORRECTAL.
  27

2.4.
 BASES
 MOLECULARES
 Y
 PATOGÉNESIS
 DEL
 CÁNCER
 COLORRECTAL.
  29

2.4.1.
 Secuencia
 adenoma-­‐carcinoma.
  31

2.4.2.
 Vía
 de
 los
 pólipos
 serrados.

  32

2.4.3.
 Vías
 moleculares
 de
 carcinogénesis
 colorrectal.
  34

2.4.4.
 Clasificación
 molecular
 del
 CCR.
  36

3.EL
 CÁNCER
 COLORRECTAL
 HEREDITARIO
 Y
 FAMILIAR. 37

3.1.
 SÍNDROME
 DE
 LYNCH
 –
 CÁNCER
 COLORRECTAL
 HEREDITARIO
 NO
 POLIPÓSICO.
  37

3.1.1.
 Concepto
 y
 variantes.
  37

3.1.2.
 Características
 clínicas.
  38

3.1.3.
 Criterios
 clínicos
 diagnósticos.
  40

3.1.4.
 Bases
 genéticas.
  42

3.1.5.
 Diagnóstico
 molecular.
  45

3.1.6.
 Cribado
 del
 SL.
  47

3.1.7.
 Tratamiento
 quirúrgico.
  47

3.2.
 POLIPOSIS
 ADENOMATOSA
 FAMILIAR
 Y
 OTRAS
 POLIPOSIS.
  48

3.2.1.
 Poliposis
 adenomatosa
 familiar.
  48

3.2.2.
 PAF
 atenuada.
  50

3.2.3.
 Poliposis
 asociada
 a
 MYH.
  51

4.EL
 CÁNCER
 COLORRECTAL
 EN
 EL
 ADULTO
 JOVEN. 52

4.1

 CARACTERÍSTICAS
 CLÍNICAS.
  53

4.2

 CARACTERÍSTICAS
 MOLECULARES.
  56

4.3.
 TRATAMIENTO.
  57

II.HIPÓTESIS 59
INDICE
III.OBJETIVOS. 61

IV.MATERIAL
 Y
 MÉTODOS. 63

1.SUJETO
 DE
 ESTUDIO. 63

1.1.
 PROCEDENCIA.
  63

1.2
 INFORMACIÓN
 RECOGIDA.
  63

1.2.1.
 Información
 clínica.
  63

1.2.2.
 Información
 familiar.
  64

2.MUESTRAS. 66

2.1.
 LÍQUIDOS
 BIOLÓGICOS.
 SANGRE
 PERIFÉRICA.
  66

2.2.
 TEJIDO
 INCLUIDO
 EN
 PARAFINA.
  69

2.2.1.
 Tinción
 hematoxilina-­‐eosina.
  69

2.2.2.
 Extracción
 de
 ADN.
  70

3.VALORACIÓN
 DE
 LA
 CANTIDAD
 Y
 CALIDAD
 DEL
 ADN. 72

4.ESTUDIO
 DE
 INESTABILIDAD
 DE
 MICROSATÉLITES
 EN
 TEJIDO
 NORMAL 74

5.ESTUDIO
 MOLECULAR
 DE
 LOS
 GENES
 DE
 REPARACIÓN
 DE
 LOS
 ERRORES
 DE
EMPAREJAMIENTO
 DEL
 ADN
 (MLH1,
 MSH2
 Y
 MSH6).
  78

5.1.
 ANÁLISIS
 DE
 MUTACIONES
 EN
 MLH1
 Y
 MSH2.
  78

5.2.
 ANÁLISIS
 DE
 GRANDES
 DELECIONES
 GENÓMICAS.
  82

5.2.1.
 MSH6.
  87

5.3.
 ESTUDIO
 DE
 HIPERMETILACIÓN
 DEL
 PROMOTOR
 DEL
 GEN
 MLH1.
  95

5.3.1.
 Controles.
  95

5.3.2.
 Modificación
 con
 bisulfito
 sódico.
  95

5.3.3.
 PCR
 específicas
 de
 presencia
 y
 ausencia
 de
 metilación.
  98

5.3.4.
 PCR
 independiente
 del
 estado
 de
 metilación.
  99

6.INMUNOHISTOQUÍMICA
 DE
 LAS
 PROTEÍNAS
 DEL
 SISTEMA
 DE
 REPARACIÓN:
 MLH1,
 MSH2,
MSH6.
  104

7.DETERMINACIÓN
 DEL
 ESTADO
 MUTACIONAL
 BRAF. 106

8.ANÁLISIS
 DEL
 FENOTIPO
 METILADOR
 DE
 ISLOTES
 CPG. 107

9.ANÁLISIS
 ESTADÍSTICOS. 108

V.
 RESULTADOS.
  110

1.CARACTERÍSTICAS
 ANATOMO-­‐CLÍNICAS. 110

2.CARACTERÍSTICAS
 FAMILIARES. 115

3.CARACTERÍSTICAS
 MOLECULARES. 116

3.1.
 COMPARACIÓN
 DE
 LOS
 GRUPOS
 SEGÚN
 LA
 IMS.
  116

3.1.1.
 Análisis
 comparativo
 dentro
 del
 grupo
 de
 jóvenes.
  116

3.1.2.
 Análisis
 comparativo
 dentro
 del
 grupo
 de
 mayores.
  121

3.1.3.
 Comparación
 entre
 tumores
 IMS
 en
 jóvenes
 y
 tumores
 IMS
 en
 mayores
 de
 69
 años.
  126

3.1.4.
 Comparación
 entre
 tumores
 EMS
 en
 jóvenes
 y
 tumores
 EMS
 en
 mayores
 de
 69
 años.
 133

3.2.
 FENOTIPO
 METILADOR
 (ISLAS
 CPG).
  136

3.2.1.
 Características
 del
 fenotipo
 metilador
 en
 menores
 de
 45
 años.
  136