Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN

69 Pages·2003·0.81 MB·Spanish

CYANMAGENTAAMARILLONEGRO
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Y MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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DE ELECTROFORESIS PARA
PROTEÍNAS Y ADN
Serie de Normas
Técnicas N° 38
S Lima - 2003
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CYANMAGENTAAMARILLONEGRO
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
DE ELECTROFORESIS PARA
PROTEÍNAS Y ADN
Serie de Normas
Técnicas N° 38
Lima - 2003
MINISTERIO DE SALUD Subcomité Editor
Ministro
Dr. Álvaro Vidal Rivadeneyra Presidente
Dra. Aída Palacios Ramírez
Viceministro
Econ. Carlos Rodríguez Cervantes
Secretario técnico
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INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
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Protección del Ambiente Para la Salud
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Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública
Volumen 19 Número 4 octubre – diciembre 2002
La Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública es una
publicación trimestral del Instituto Nacional de Salud que estimula la
divulgación de trabajos teóricos o aportes prácticos desarrollados por
técnicos y científicos, promueve el avance y la aplicación de la
investigación y experiencia científica en salud
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Copyright octubre – diciembre 2002 INS-PERÚ
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del Instituto Nacional de Salud Versión impresa
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Telf.: (051-1)471-9920 Anexo 162
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ARTES & DISEÑOS LASER S.R.LTDA. Página web: www.ins.gob.pe
Calle Las Turquesas 263-265-269 - Balconcillo - Lima 13
Teléfono: 265-8320 Telefax: 266-0075 Editor: Dr. Leonid Lecca García
e-mail: [email protected] E-mail: [email protected]
MPR-CNSP-016 Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ELECTROFORESIS
PARA PROTEÍNAS Y ADN
ELABORACIÓN:
Blgo. Carlos Augusto Yábar Varas
División de Biología Molecular
Centro Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
Lima-Perú
MPR-CNSP-016 I Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
AGRADECIMIENTO:
Blgo. Roger Calderón Espinoza
Blgo. Carlos Padilla Rojas
Blgo. Christian Baldeviano Vidalón
Blgo. Omar Cáceres Rey
Blga. Gisely Hijar Guerra
Blga. Elizabeth Sánchez Romaní
División de Biología Molecular
Centro Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
Catalogación hecha por el Centro de Documentación e Información del INS
Yábar Varas, Carlos.
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN / Elaborado por
Carlos Yábar Varas. — Lima : Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud,
2003.
59 p. : 30 cm. — (Serie de Normas Técnicas; 38)
1. PROTEINAS /aislamiento y purificación 2. ADN /aislamiento y purificación
3. ELECTROFORESIS
I. Yábar Varas, Carlos
II. Instituto Nacional de Salud (Perú)
III. Perú. Ministerio de Salud
ISBN 9972 – 857 – 26 – 3 (O.C.)
ISBN 9972 – 857 – 38 – 7 (N°38)
ISSN 1607 – 4904
Hecho el Depósito Legal Nº 1501152003-4205
©Ministerio de Salud, 2003
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©Instituto Nacional de Salud, 2003
Cápac Yupanqui 1400, Jesús María, Lima, Perú
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Publicación aprobada con R.J. Nº 460-2003-J-OPD/INS
Se autoriza su reproducción total o parcial siempre y cuando se cite la fuente.
MPR-CNSP-016 II Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
CONTENIDO
INTRODUCCIÓN V
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 1: GENERALIDADES 1
1.1 Objetivo 1
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1.2 Campo de aplicación 1
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1.3 Abreviaturas y definiciones 1
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 2: MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD 3
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 3: MANEJO DE MUESTRAS Y REACTIVOS EN BIOLOGÍA MOLECULAR 5
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 4: PROCEDIMIENTOS PARA LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS 7
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.1 Objetivo 7
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.2 Materiales 7
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.3 Ensamblaje de la cámara de electroforesis 7
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.4 Preparación de geles de poliacrilamida 8
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.5 Preparación del gel de resolución 11
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.6 Preparación del gel de empacamiento 12
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.7 Preparación de la muestra biológica 12
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.8 Electroforesis 13
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.9 Coloración y visualización de las proteínas usando azul brillante de coomasie 16
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.10 Interpretación de resultados 17
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4.11 Factores que afectan la migración de las proteínas 19
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 5: PROCEDIMIENTOS PARA LA ELECTROFORESIS DE ADN 21
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.1 Objetivo general 21
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.2 Electroforesis vertical 21
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.3 Electroforesis de ADN en geles de poliacrilamida 22
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.4 Preparación de geles de agarosa para ADN 25
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.5 Electroforesis de ADN 27
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.6 Coloración y visualización de ADN en geles de poliacrilamida y agarosa usando
bromuro de etidio 28
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.7 Coloración y visualización de ADN en geles de poliacrilamida con nitrato de plata 30
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
5.8 Factores que afectan la migración del ADN 32
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 6: VARIANTES DE ELECTROFORESIS 35
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
6.1 Electroforesis bidimensional 35
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
6.2 Electroforesis de capilaridad 35
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
6.3 Electroforesis en campo pulsado (PFEG) 36
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 7: VERIFICACIÓN DE LA CALIDAD ÓPTIMA DE LOS EQUIPOS Y REACTIVOS
EMPLEADOS 37
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.1 Generalidades 37
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.2 Buffer para electroforesis de proteínas y ADN 37
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.3 Persulfato de amonio 37
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
MPR-CNSP-016 III Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
7.4 Bromuro de etidio 37
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.5 Agarosa 38
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.6 Poliacrilamida al 30% 38
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.7 Agua destilada 38
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
7.8 Equipos de laboratorio 38
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
SECCIÓN 8: REGISTROS Y ARCHIVOS 39
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
BIBLIOGRAFÍA 41
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXOS 43
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO A: PREPARACIÓN DE SOLUCIONES PARA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS Y
ELECTROFORESIS DE ADN 43
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO B: UNIDADES Y FÓRMULAS 49
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO C: MEDIDAS A TOMARSE EN CASO DE CONTACTO ACCIDENTAL CON
REACTIVOS TÓXICOS 51
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO D: PROBLEMAS MÁS COMUNES DURANTE LOS PROCEDIMIENTOS DE
ELECTROFORESIS 53
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO E: EJERCICIOS RESUELTOS PARA LA PREPARACIÓN DE SOLUCIONES 55
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
ANEXO F: PÁGINAS WEB RECOMENDADAS 59
○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
MPR-CNSP-016 IV Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
INTRODUCCIÓN
La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del análisis de los ácidos nucleicos y proteínas.
Y así como el microscopio permite visualizar microorganismos y estructuras similares, la electroforesis nos ayuda a
observar los ácidos nucleicos y proteínas al final del procedimiento.
El principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de
matriz de naturaleza porosa, en el cual, por acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño
o peso molecular. Para controlar el avance de la separación de las moléculas en la matriz y establecer un patrón de
fragmentos, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes. Estos pasos facilitan la visualización de
las moléculas a manera de simples bandas las cuales serán posteriormente analizadas e interpretadas.
En biología molecular, la mayoría de los estudios básicos y aplicados requieren el uso de la electroforesis; sin
embargo, este procedimiento presenta variaciones de acuerdo al tipo de estudio que se piensa ejecutar. En la
electroforesis de tipo vertical, se analizan tanto moléculas de ADN como proteínas, mientras que en la electroforesis
horizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN. De otro lado, existen otros métodos electroforéticos que presentan
ciertas modificaciones, así tenemos la electroforesis en campo pulsado, mayormente usada para separar fragmentos
muy grandes de ADN (ADN genómico), la electroforesis bidimensional para un análisis más sofisticado de las
proteínas etc.
Es importante señalar que la electroforesis en asociación con otras técnicas tales como PCR, e hibridación, brinda
una gran ayuda en el campo de la salud. Gracias a esta técnica es posible visualizar las bandas de ARN o ADN de
patógenos, detectar cambios o mutaciones a nivel genético, visualizar una nueva proteína, entre otros.
El presente manual de procedimientos es la recopilación de protocolos actualizados por los investigadores de la
División de Biología Molecular del Instituto Nacional de Salud. En este material se incluye, además de los
procedimientos técnicos de la electroforesis, un anexo indicando el modo de preparación de soluciones de
electroforesis, unidades y fórmulas básicas a ser aplicadas y algunas importantes medidas de bioseguridad que
deben considerarse durante la manipulación de los reactivos.
MPR-CNSP-016 V Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
SECCIÓN 1
GENERALIDADES
1.1 OBJETIVO
Establecer los procedimientos de la técnica de electroforesis de ADN y proteínas para ser difundidas
en la red de laboratorios.
1.2 CAMPO DE APLICACIÓN
Laboratorios de nivel de bioseguridad II que realicen análisis y determinación de ADN y proteínas en
general.
1.3 ABREVIATURAS Y DEFINICIONES
1.3.1 ADN: ácido desoxirribonucleico.
1.3.2 ARN: ácido ribonucleico.
1.3.3 kDa: kilodaltons.
1.3.4 nM: nanomolar.
1.3.5 OD: densidad óptica.
1.3.6 pb: pares de bases.
1.3.7 PCR: reacción en cadena de polimerasa (Polimerase chain reaction).
1.3.8 pg: picogramo.
1.3.9 rpm: revoluciones por minuto.
µ
1.3.10 L: microlitro.
µ
1.3.11 M: micromolar.
1.3.12 ácido desoxirribonucleico: molécula compuesta de un anillo de desoxiribosa, una base nitrogenada
y un grupo fosfato que en su conjunto forman una estructura de doble hebra tipo helicoidal. Constituye
el material genético de todo tipo de células y virus de ADN, y tiene como función transmitir la información
genética de una generación a otra.
1.3.13 ácido ribonucleico: molécula compuesta de un anillo de ribosa, una base nitrogenada y un grupo
fosfato. Presenta un rol informativo, estructural y enzimático a nivel de ADN y durante la síntesis de
proteínas.
1.3.14 aminoácido: pequeñas moléculas conformadas por un grupo amino y otro carboxilo y que en su
conjunto forman la estructura de las proteínas.
1.3.15 anfoterismo: propiedad de las proteínas para adaptarse al pH del medio y cambiar de carga,
dependiendo del pH y su punto isoléctrico (pI).
MPR-CNSP-016 1 Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN
1.3.16 densidad óptica: unidad de medida de absorción de la luz, definido como el logaritmo de la intensidad
de luz de entrada entre la intensidad de luz de salida.
1.3.17 desnaturalización de proteínas: pérdida de las estructuras nativas (secundaria, terciaria y
cuarternaria) de una proteína, adoptando la estructura primaria únicamente.
1.3.18 electroforesis: técnica utilizada para separar partículas coloidales tales como proteínas o ácidos
nucléicos a través una matriz sólida (gel de agarosa o poliacrilamida) de acuerdo a su tamaño y
carga eléctrica mediante la aplicación de un campo eléctrico (IUPAC, NHLBI, DOE).
1.3.19 enfoque isoeléctrico: técnica en gradiente de pH montada entre un ánodo y un cátodo, de donde
éste último tiene un pH más alto que el primero.
1.3.20 estructura cuaternaria: se refiere a la estructura tridimensional compleja adoptada por la proteína
compuesta de varios monómeros o polipéptidos.
1.3.21 estructura primaria de proteínas: se refiere a la estructura lineal formada por la unión secuencial
de aminoácidos.
1.3.22 estructura secundaria de proteínas: se refiere a la estructura bidimensional formada por el
plegamiento de la estructura primaria estabilizada por interacciones débiles.
1.3.23 estructura terciaria de proteínas: se refiere a la estructura tridimensional adoptada por la proteína
estabilizada por enlaces covalentes y no covalentes.
1.3.24 grado biología molecular: alto grado de pureza (ausencia de contaminantes externos como
nucleasas, proteasas o pirógenos) que presentan algunos reactivos que son utilizados en pruebas
moleculares.
1.3.25 kilodalton: unidad de medida referente al peso molecular de las proteínas en general.
1.3.26 marcador estándar de peso molecular: fragmentos de ADN de peso molecular conocido utilizados
para determinar el tamaño de una molécula de ADN de interés por comparación después de una
electroforesis.
1.3.27 pares de bases: cada par de nucleótidos complementarios que en conjunto forman una doble hebra
de ADN.
1.3.28 PCR: polimerase chain reaction o reacción en cadena de la polimerasa; reacción enzimática in vitro
por el cual mediante múltiples ciclos de denaturación, alineamiento y extensión se sintetizan grandes
cantidades de una región genética específica.
1.3.29 plásmido: moléculas de ADN circular que se encuentran en la mayoría de bacterias y otros organismos
procariontes y que pueden llevar información genética para el organismo que lo alberga.
1.3.30 polimerización: acción química por el cual las moléculas de acrilamida y bisacrilamida forman un
entramado a manera de malla por la acción de catalizadores (TEMED y APS) generando una sustancia
gelatinosa.
1.3.31 producto de amplificación: Moléculas de ADN sintetizadas en múltiples copias in vitro a partir de
ADN molde mediante el uso de PCR.
MPR-CNSP-016 2 Instituto Nacional de Salud