Construcción de cepas de pichia pastoris portadoras del DNAc de la hormona del crecimiento ...

122 Pages·2011·22.07 MB·Spanish

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON
FACULTAD DE MEDICINA
CONSTRUCCION DE CEPAS DE Picha partan*
PORTADORAS DEL DNAc DE LA HORMONA
DEL CRECIMIENTO BOVINO
BIOLOGO HUGO LEONID GALLARDO BLANCO
Como requisito parcial para obtener el Grado de
MAESTRIA EN GENOAS CON ESPECIALIDAD EN
BIOLOGIA MOLECULAR E INGENIERIA GENETICA
MARZO, 1999
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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN
FACULTAD DE MEDICINA
CONSTRUCCIÓN DE CEPAS DE Pichia pastoris
PORTADORAS DEL DNAc DE LA HORMONA
DEL CRECIMIENTO BOVINO
Por
Biólogo Hugo Leonid Gallardo Blanco
Como requisito parcial para obtener el Grado de
MAESTRIA EN CIENCIAS con Especialidad en
Biología Molecular e Ingeniería Genética
Marzo, 1999
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T S S MAESTRA
CONSTRUCCIÓN DE CEPAS DE Piehiapostorís
PORTADORAS DEL Me DE LA HORMONA DEL
CRECIMIENTO BOVINO
Por
Hugo Leonid Gallardo Blanco
Biólogo
Aprobación de Tesis:
Dra. Herminia Q/Ma^ines Rodríguez Presidente
Agnes Revol de Mendosa Secretario
a
Asesor Dr« HugoAÍ* BarreraSáldaña. 1er Vocal
Coasesora Dra. Martha Guerrero de Viader 2o Vocal
Dr« Jorge R, Ka was 3er Vocal
Dr.R- cadoLongoria
Subdirector de on y Estudios de Posgrado
ÁREA DE TRABAJO
El presente trabajo titulado "Construcción de Cepas
de Pichia pastoris Portadoras del DNAc de la Hormona del
Crecimiento Bovino" fue llevado a cabo por el Biólogo Hugo
Leonid Gallardo Blanco en el Laboratorio de Biotecnología de
la Unidad de Laboratorios de Ingeniería y Expresión
Genéticas del Departamento de Bioquímica de la Facultad de
Medicina de la U.A.N.L., con la Asesoría del Dr. Hugo A.
Barrera Saldaña y la Co-asesoría de la Dra. Martha Guerrero de
Viader.
AGRADECIMIENTOS
A Carmen, Ana Laura» Claudio, Mario y CeUa por ser buenos compañeros de
maestría.
A los doctores Hugo A. Barrera Saldaña, Agnés Revoi de Mendoza y
Herminia G. Martínez Rodríguez, por su ayuda.
A la Dra. Martha Guerrero de Vlader
A todo el excelente Personal del Departamento de Bioquímica.
A) Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología por el apoyo económico para
la realización de mis estudios.
DEDICATORIA
A mis padres por su confianza, apoyo y amor; Elvira Blanco
Flores y Hugo Gallardo G. y a mi hermana Diana C. Gallardo B,
A mi esposa Celia Nohemí y a nuestra hija Karla Itzel,
ustedes son la fuerza que me permite seguir adelante y dar
todo mi esfuerzo, en el trabajo y en la familia.
CAPÍTULO 1 1
INTRODUCCIÓN 1
1.1 Las Hormonas del Crecimiento 1
1.2 La BGHr: su Función Biológica y su uso en la Ganadería 2
1.2.1 Controversias sobre el uso de BGHr: 6
1.2.2 Características Moleculares de la BGH: 7
1.2.3 Producción de PGH, OGH y BGH Recombinantes (r) en E. coli 9
1.2.3.1 Expresión en E. coli: 9
1.2.3.2 Producción de BGHr en Saccharomyces cerevisiae y Streptomyces
lividans 11
1.3 Pichia pastoris como Hospedero Biotecnológico 11
1.3.1 Ventajas de las Levaduras 11
1.3.2 Levaduras Metilotróficas 12
1.3.3 Producción de Proteínas Recombinantes en Pichia pastoris: 14
1.3.4 Introducción de Genes Extraños en Pichia pastoris: 16
1.3.5 Los Plásmidos pPlC9 y pPIC9K: 17
1.3.6 Integración del Cassette de Expresión al Genoma de P. pastoris 21
1.3.6.1 Inserción Gènica en AOX1: 21
1.3.6.2 Inserción Gènica en his4: 22
1.3.6.3 Reemplazamiento Gènico en AOX1: 23
1.3.7 El Procesamiento de la Secuencia Señal en P. pastoris: 24
1.4 ¿Es Pichia pastoris una Panacea? 25
1.5 Producción de GHs en Nuestro Laboratorio 28
1.6 Justificación: 28
1.7 Objetivo General: 29
1.7.1 Objetivos Específicos: 29